一、产品基本属性产品名称Sepharose 4B中文名称Sepharose 4B琼脂糖凝胶基质通用名称4% Agarose Gel Filtration Matrix / Agarose Resin基质组成约4%琼脂糖CAS号9012-36-6琼脂糖产品类型琼脂糖凝胶过滤基质、亲和填料基础基质颗粒形态球形多孔凝胶颗粒典型粒径45–165 μm球状蛋白分级范围约60–20,000 kDa排阻限2 × 10⁷ Da具体定义与被分离分子类型有关常见用途凝胶过滤、蛋白/大分子分离、亲和配基偶联及功能化琼脂糖微球制备Sepharose 4B是一种经典的4%琼脂糖凝胶基质具有较大的孔结构和亲水性表面既可以直接用于分子排阻分离也经常作为Protein A、Protein G、谷胱甘肽、螯合基团及其他亲和配基固定化的基础载体。二、理化性质1. 外观与颗粒结构Sepharose 4B属于球形、含水型琼脂糖凝胶颗粒。其基质由琼脂糖多糖链形成三维多孔网络颗粒内部含有大量水相空间。典型商品Sepharose 4B的颗粒尺寸约为45–165 μm这种多孔珠状结构使蛋白、多糖及其他大分子能够根据尺寸不同进入不同程度的内部孔道。2. 亲水性较强琼脂糖骨架含有大量羟基因此Sepharose 4B具有较强的亲水性。其表面通常具有低疏水性较低非特异性吸附良好的水相相容性因此适合作为蛋白质、生物大分子以及亲和色谱材料的基础载体。3. 孔径较大分级范围宽4%琼脂糖形成的网络具有较大的内部孔道。典型Sepharose 4B对球状蛋白的分级范围约为60–20,000 kDa因此特别适合较大蛋白复合物、病Poison 颗粒及其他高分子量组分相关的凝胶过滤研究。在约90 μm平均粒径的4%琼脂糖湿珠中公开资料给出的平均孔径约为30 nm、总表面积约5 m²/mL湿珠这些数据属于特定Sepharose 4B材料可作为结构参考。4. 分子排阻性质Sepharose 4B本身不依靠离子交换或特异性亲和作用完成分离而主要利用分子进入凝胶孔道能力的差异较大分子 → 难以进入内部孔道 → 较早洗脱较小分子 → 可进入更多内部孔道 → 保留时间增加因此其分离行为主要与分子的水动力尺寸有关而不仅仅取决于理论分子量。5. pH适用范围典型Sepharose 4B商品资料给出的工作pH范围约为pH 4–9实际使用中还应考虑蛋白稳定性、偶联配基以及缓冲液组成。需要注意Sepharose CL-4B、Sepharose 4 Fast Flow等高度交联产品具有更宽的化学耐受范围因此不能把这些产品的耐酸碱参数直接作为普通Sepharose 4B的指标。6. 温度与物理稳定性普通Sepharose 4B并不是高度交联型琼脂糖基质对高温和冻结较为敏感。储存和实验过程中应特别注意避免冷冻避免高温避免剧烈机械剪切公开产品资料指出普通Sepharose在约40 ℃以上其珠体结构可能受到破坏同时冻结可对珠体造成不可逆损伤。因此不建议将普通Sepharose 4B按照高交联Fast Flow型琼脂糖树脂的方式处理。7. 流速与机械强度Sepharose 4B属于经典软凝胶基质机械刚性低于高度交联的Sepharose CL-4B和Sepharose 4 Fast Flow。典型资料给出的较大线流速约为11.5 cm/h因此更适合低压或重力流条件不适合直接采用高压高速色谱条件。如果实验需要更高流速和机械稳定性通常应选择CL-4B、4 Fast Flow或其他高度交联琼脂糖基质。8. 表面易于进一步功能化Sepharose 4B的琼脂糖骨架含有丰富羟基可以经过活化后进一步偶联不同功能配基例如Protein A / Protein GGlutathioneNTA/IDA肝素凝集素抗体多肽及其他亲和配体因此它不仅是凝胶过滤介质也是经典的亲和色谱基础基质。主要理化性质总结4%琼脂糖基质 → 45–165 μm球形多孔颗粒 → 高亲水性 → 大孔径和宽分级范围 → pH约4–9工作 → 软凝胶、低压操作 → 避免冷冻和高温 → 表面羟基可进一步活化偶联。——以上资料由XARuiXi小编提供仅用于科研
